top of page
Scientist on Tablet

פרוטוקול הכנה להדגמה וניסוי

צביעת גראם

הוראות

בטיחות:

  •  יש לעבוד עם חלוק, נעליים סגורות ומשקפי מגן.

  • יש לעבוד בלי כפפות.

  • יש לאסוף שיער ארוך.

     

ציוד/כלים
דרושים:

  •  זכוכיות נושא

  •  מקל זריעה

  •  טוש דק

  •  אטב לעבודה באש לזכוכית נושא

  •  גזייה וגפרורים

  •  נייר סופג

  •  משטפת מים

  •  מיקרוסקופ אור

חומרים
דרושים:

       אי קולי – גראם־שלילי.

       בצילוס סובטיליס, סטפילוקוקוס אאורוס – גראם־חיובי.

  •  מים מזוקקים

  •  אתנול 96%

גבישי נתרן כלורי 2

אמצעי המחשה

מהלך ההכנה

מהלך הדגמה/ניסוי

    הכנת הפרפרט: קיבוע חיידקים על זכוכית נושא

1.      כתבו את שם החיידק על קצה הזכוכית.

2.      הניחו טיפת מים קטנה במרכז הזכוכית.

3.      קחו דגימה קטנה ממושבת חיידקים בעזרת מקל זריעה, ומרחו אותה בתוך טיפת המים.

4.      הדליקו את הגזייה.

5.      אחזו בפרפרט בעזרת אטב עץ כך שהחיידקים פונים כלפי מעלה.

6.      העבירו את הפרפרט בחלק העליון של הלהבה שלוש פעמים. יש להימנע מחימום יתר.

7.      חזרו על שלבים 1–3 עבור סוגי החיידקים השונים.

 

    צביעת גראם

1.   אחזו את הפרפרט בעזרת אטב עץ לקראת הצביעה.

2.   טפטפו קריסטל סגול על החיידקים והמתינו כדקה.

3.   שִטפו בעדינות את הצבע בעזרת משטפת המים.

4.   טפטפו לוגול על החיידקים.

5.   שִטפו בעדינות את הצבע בעזרת משטפת המים.

6.   שִטפו בתמיסת אתנול 96% עד ליציאת הצבע.

7.   שִטפו מייד ובעדינות בעזרת משטפת מים.

8.   טפטפו פוקסין על החיידקים, והמתינו כדקה.

9.   שִטפו בעדינות את הצבע בעזרת משטפת מים.

10. יבשו את הזכוכית: עדיף באוויר, או בזהירות רבה עם נייר סופג.

11. התבוננו בדגימה במיקרוסקופ אור וקבעו את הפרטים הבאים:

  • מהו צבע החיידקים.

  • מהו סוג הצביעה (גראם־חיובי או גראם־שלילי).

  • מהי צורת החיידקים (עגולים, מוארכים וכו'). 

  •   

תוצאות צפויות

  •  חיידקים גראם־חיוביים: ייצבעו בצבע סגול.

  •  חיידקים גראם־שליליים: ייצבעו בצבע ורוד או אדום.

הסבר מדעי

בסוף המאה ה־19 פיתח הרופא והבקטריולוג הדני הנס כריסטיאן גראם שיטה המאפשרת להבחין בין חיידקים – צביעת גראם. זו הייתה אחת השיטות הראשונות שאפשרו סיווג מהיר של חיידקים, והיא משמשת עד היום כלי בסיסי בזיהוי חיידקים ובהכוונת טיפול אנטיביוטי.

צביעת גראם מאפשרת להבחין בין חיידקים על פי מבנה דופן התא שלהם. חיידקים הם יצורים חד־תאיים, המוקפים בדופן תא המעניקה לתא צורה והגנה.

חיידקים גראם־חיוביים הם בעלי שכבת פפטידוגליקן עבה, הלוכדת את הצבע הסגול.

חיידקים גראם־שליליים הם בעלי שכבת פפטידוגליקן דקה וקרום חיצוני נוסף, ולכן אינם שומרים על הצבע הסגול לאחר שלב השטיפה באתנול.

במהלך הצביעה מתרחשים התהליכים האלה:

  • כל החיידקים נצבעים תחילה בסגול (Crystal Violet).

  • היוד (תמיסת לוגול) יוצר קומפלקס עם הצבע הסגול, שמקשה על יציאתו מהתא.

  • האתנול פועל כגורם הוצאת הצבע: הוא ממיס את הקרום החיצוני בחיידקים גראם־שליליים ומאפשר יציאה של קומפלקס הצבע, בעוד שבחיידקים גראם־חיוביים השכבה העבה שומרת על הקרום.

  • פוקסין צובע את החיידקים שאיבדו את הצבע הסגול.

טיפים

  •  הקפידו על ייבוש מלא לפני קיבוע וצביעה.

  •  חימום יתר של זכוכית הנושא עלול לפגוע במבנה החיידקים.

  •  ודאו שהזכוכית יבשה לחלוטין לפני צפייה במיקרוסקופ.

  •  הקפידו על זמני הצביעה – זמן ארוך או קצר מדי ישפיע על התוצאה.

  •  ניתן לרכוש את תמיסות הצביעה.

פינוי חומרים

bottom of page